紅外光密度法：體外膠帶剝離實(shí)驗(yàn)的角質(zhì)深度標(biāo)尺

在藥物透皮吸收研究中，角質(zhì)層是繞不開的 "關(guān)卡"。它作為皮膚最外層的保護(hù)屏障，不僅決定了外界物質(zhì)能否進(jìn)入皮膚，還影響著藥物療效和護(hù)膚品功效的發(fā)揮。如何精準(zhǔn)測(cè)量活性成分在角質(zhì)層的深度分布、判斷其是否被去除，一直是科學(xué)家們的研究熱點(diǎn)。

德國(guó)薩爾大學(xué)Hahn T研究團(tuán)隊(duì)一項(xiàng)發(fā)表在《Skin Pharmacology and Physiology》的研究為這一難題提供了新方案 —— 紅外光密度測(cè)定法（IR-D），一種快速、非破壞性的檢測(cè)技術(shù)，讓我們能更精準(zhǔn)地知道膠帶剝離后皮膚上殘留的角質(zhì)量。

為什么角質(zhì)層研究這么重要？

皮膚是人體最大的器官，而角質(zhì)層（stratum corneum，SC）是皮膚的 "第一道防線"。它由多層死亡的角質(zhì)細(xì)胞組成，像一道致密的 "城墻"，既能防止水分流失，又能阻擋外界有害物質(zhì)入侵。

對(duì)于藥物研發(fā)來(lái)說(shuō)，很多外用藥需要穿過(guò)角質(zhì)層才能發(fā)揮作用；對(duì)于護(hù)膚品而言，有效成分能否滲透到目標(biāo)層次（比如美白成分到達(dá)基底層、保濕成分停留在角質(zhì)層）直接決定了產(chǎn)品效果；而在毒理學(xué)評(píng)估中，還要評(píng)估有害物質(zhì)是否會(huì)通過(guò)角質(zhì)層進(jìn)入體內(nèi)。

因此，搞清楚有效成分在角質(zhì)層中的深度分布，以及如何確定角質(zhì)層是否被去除（避免過(guò)度剝離損傷皮膚或剝離不足導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)），是透皮相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究的難題之一。

傳統(tǒng)方法的 "痛點(diǎn)"：耗時(shí)、破壞性強(qiáng)

目前，研究角質(zhì)層常用的方法是 "膠帶剝離法"：用粘性膠帶反復(fù)粘貼皮膚，每層膠帶會(huì)粘下部分角質(zhì)層，通過(guò)分析每層膠帶上的角質(zhì)量，就能推斷活性物質(zhì)在角質(zhì)層的深度分布。

但這個(gè)方法有兩個(gè)難點(diǎn)需要解決：

1. 如何準(zhǔn)確測(cè)量每層膠帶上的角質(zhì)量？

2. 如何判斷什么時(shí)候皮膚角質(zhì)層被剝離（該停手了）？

傳統(tǒng)方法存在不少問(wèn)題：

• 重量法：通過(guò)稱重膠帶前后的重量差計(jì)算角質(zhì)層量，但容易受汗液、皮膚油脂、制劑殘留影響，誤差大；

• 染色法：用染料（如臺(tái)盼藍(lán)）染色后測(cè)吸收，但靈敏度低，且膠帶本身可能著色，干擾結(jié)果；

• 蛋白質(zhì)測(cè)定法（如 BCA 法）：這是目前的 "金標(biāo)準(zhǔn)"，通過(guò)檢測(cè)角質(zhì)層中的蛋白質(zhì)含量推算其量，但需要把膠帶放入化學(xué)試劑中提取蛋白質(zhì)，屬于破壞性檢測(cè) —— 測(cè)完后膠帶就不能再用于分析藥物或護(hù)膚品成分了，還耗時(shí)（至少幾個(gè)小時(shí)）。

這些問(wèn)題讓角質(zhì)層研究效率低、成本高，也影響了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

角質(zhì)量定量：紅外光密度測(cè)定法

科學(xué)家們找到了一種更高效的方法 —— 紅外光密度測(cè)定法（IR-D），儀器工具是Labodorf 850C皮膚角質(zhì)量測(cè)試儀。

（Labodorf  850C皮膚角質(zhì)量測(cè)試儀）

它的測(cè)量原理是：用 850nm 的紅外光照射粘有角質(zhì)層的膠帶，測(cè)量光穿過(guò)膠帶后的吸光強(qiáng)度變化（稱為 "偽吸收"，類似光被角質(zhì)層散射、反射導(dǎo)致的強(qiáng)度下降）。研究發(fā)現(xiàn)，這種 "偽吸收" 的強(qiáng)度和角質(zhì)層中的蛋白含量成線性關(guān)系 —— 也就是說(shuō)，通過(guò)光強(qiáng)度變化，就能快速算出膠帶上的角質(zhì)層量。

和傳統(tǒng)方法相比，它的優(yōu)勢(shì)一目了然：

• 非破壞性：膠帶不用被化學(xué)試劑處理，測(cè)完后還能用于分析藥物或護(hù)膚品成分含量；

• 快速：貼完膠帶穩(wěn)定3分鐘左右，放入儀器瞬間出結(jié)果，無(wú)需等待幾小時(shí)；

• 精準(zhǔn)：不受皮膚油脂、汗液影響，也不用考慮染色干擾。

實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

為了驗(yàn)證紅外法角質(zhì)量測(cè)試的可靠性，研究團(tuán)隊(duì)做了一系列實(shí)驗(yàn)，從體內(nèi)到體外，測(cè)試比對(duì)。

實(shí)驗(yàn) 1：體內(nèi)測(cè)試 —— 不同膠帶、不同部位都適用

研究先在志愿者身上做了實(shí)驗(yàn)：用兩種常見膠帶（Tesa 透明膠帶和D-Squame 膠帶），分別在小臂內(nèi)側(cè)和腹部進(jìn)行剝離，然后用 IR-D 和 BCA 法（金標(biāo)準(zhǔn)）對(duì)比。

結(jié)果顯示：兩種方法的結(jié)果高度吻合（相關(guān)系數(shù) r2 最高達(dá) 0.63），而且不管是哪種膠帶、哪個(gè)部位（小臂、腹部），IR-D 都能穩(wěn)定工作。這說(shuō)明它在人體皮膚上的測(cè)量是靠譜的。

體內(nèi)膠帶剝離實(shí)驗(yàn)：（a）使用D膠帶在3名志愿者的前臂掌側(cè)進(jìn)行剝離；（b）使用tesa 膠帶在4名志愿者的前臂掌側(cè)及腹部相應(yīng)解剖部位進(jìn)行剝離。兩張圖中均繪制了線性回歸線。每位捐贈(zèng)者均接受了20次連續(xù)膠帶剝離。

實(shí)驗(yàn) 2：體外測(cè)試 —— 新鮮和冷凍皮膚都能測(cè)

研究的重點(diǎn)是體外實(shí)驗(yàn)（皮膚來(lái)自經(jīng)過(guò)德國(guó)萊巴赫市慈善醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的整形手術(shù)的人體皮膚樣本），團(tuán)隊(duì)測(cè)試了兩種皮膚：

• 新鮮的離體皮膚；

• 冷凍儲(chǔ)存 1 周、1 個(gè)月、3 個(gè)月的皮膚（模擬實(shí)驗(yàn)室常見的樣本儲(chǔ)存情況）。

實(shí)驗(yàn)證明：無(wú)論是新鮮皮膚還是冷凍 3 個(gè)月的皮膚，850C皮膚角質(zhì)量測(cè)試儀測(cè)量得到的角質(zhì)層深度和 BCA 法幾乎一致。這意味著，即使皮膚樣本被冷凍保存，依然有效測(cè)試，解決了實(shí)驗(yàn)室樣本儲(chǔ)存后的檢測(cè)難題。

兩位不同捐贈(zèng)者的腹部皮膚經(jīng)連續(xù)膠帶剝離后到達(dá)的角質(zhì)層（SC）深度。使用tesa膠帶在體外對(duì)新鮮未冷凍的皮膚以及在-26°C下儲(chǔ)存3個(gè)月的皮膚進(jìn)行了膠帶剝離實(shí)驗(yàn)。空心符號(hào)代表通過(guò)紅外密度測(cè)定法（IR-D）計(jì)算得出的深度，實(shí)心符號(hào)代表通過(guò)BCA測(cè)定法計(jì)算得出的深度。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)、每位捐贈(zèng)者均取2個(gè)皮膚活檢樣本，每個(gè)樣本進(jìn)行20次連續(xù)膠帶剝離。圓圈=皮膚活檢樣本A；三角形=皮膚活檢樣本B。

實(shí)驗(yàn) 3：判斷 "剝離終點(diǎn)"—— 告訴你什么時(shí)候該停手

在過(guò)去實(shí)驗(yàn)研究人員一般憑經(jīng)驗(yàn)決定剝離多少次膠帶（通常 20-100次），但每個(gè)人的角質(zhì)層厚度不同，同一人的不同部位也有差異，固定次數(shù)很容易導(dǎo)致 "過(guò)度剝離"（損傷皮膚）或 "剝離不足"（角質(zhì)層沒(méi)去干凈），最終導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)離散、重現(xiàn)性差。

IR-D 的一個(gè)大亮點(diǎn)是：它能通過(guò) "定量下限（LLOQ）" 判斷角質(zhì)層是否去除。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng) IR-D 的信號(hào)低于 LLOQ 時(shí)，剩余的角質(zhì)層不到總量的 5%，可以認(rèn)為已經(jīng)剝離。

這意味著，以后不用再靠 "猜" 來(lái)決定貼多少層膠帶了 —— 儀器會(huì)實(shí)時(shí)告訴你："好了，可以停了"

3位不同捐贈(zèng)者的完整皮膚（a、c、e）和用tesa膠帶剝離至紅外密度測(cè)定法（IR-D）的850皮膚角質(zhì)量測(cè)試儀測(cè)得的定量下限（LLOQ）后的皮膚（b、d、f）的橫截面。

紅外光密度法的應(yīng)用價(jià)值：讓透皮研究更高效、更精準(zhǔn)

綜合所有實(shí)驗(yàn)，IR-D法 展現(xiàn)出三個(gè)特點(diǎn)：

1. 非破壞性：同一膠帶既能用 IR-D 測(cè)角質(zhì)層深度，又能后續(xù)分析藥物或護(hù)膚品成分濃度，方便快捷；

2. 實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)：在實(shí)驗(yàn)中根據(jù)皮膚樣本情況隨時(shí)調(diào)整剝離次數(shù)，避免主觀判斷；

3. 適用范圍廣：不管是新鮮皮膚還是冷凍儲(chǔ)存的皮膚，不管是哪種膠帶、哪個(gè)身體部位，都能測(cè)量。

對(duì)于透皮給藥研發(fā)而言，能加速透皮藥物的研發(fā)過(guò)程，明確藥物有效成分在角質(zhì)層的分布規(guī)律；對(duì)于護(hù)膚品研發(fā)來(lái)說(shuō)，它能更精準(zhǔn)地測(cè)試成分在皮膚中的滲透深度，指導(dǎo)產(chǎn)品配方優(yōu)化；對(duì)于毒理學(xué)研究，能更高效地評(píng)估有害物質(zhì)的皮膚滲透風(fēng)險(xiǎn)。

從實(shí)驗(yàn)室到應(yīng)用，紅外法讓皮膚研究 "提速"

角質(zhì)層雖薄，卻是皮膚研究的 "重中之重"。紅外光密度測(cè)定法的出現(xiàn)，解決了傳統(tǒng)方法耗時(shí)、破壞性強(qiáng)、準(zhǔn)確性不足的問(wèn)題，為透皮吸收研究提供了全新的工具。

未來(lái)，隨著技術(shù)的普及，我們或許能看到更多基于精準(zhǔn)皮膚滲透數(shù)據(jù)的藥品和護(hù)膚品 —— 畢竟，只有真正 "看穿" 角質(zhì)層的秘密，才能讓有效成分更精準(zhǔn)地發(fā)揮作用。

參考文獻(xiàn)：

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